期刊简介
《国际病毒学杂志》是专业刊载病毒学基础、临床、药物、疫苗、防控等的综合性专业学术医学期刊。主要设有述评、笔谈、论著、综述、讲座、临床病理（病例）讨论、国际交流、疫情报告、会议纪要及国内外学术动态等栏目。读者为本专业科研人员，从事医学病毒学研究的科研人员；高、中等医药院校的有关教学人员；病毒性传染病的临床医师；生物制品工作者；各级卫生防疫工作者；临床检验工作者，以及与人畜共患病毒性疾病防治有关的科技工作者。
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- 杂志名称：国际病毒学杂志
- 主管单位：国外医学（病毒学分册）
- 主办单位：国家卫生健康委员会
- 国际刊号：18-223
- 国内刊号：1673-4092
- 出版周期：
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：
检测甲型流感病毒的绿色荧光蛋白报告系统的构建与鉴定
崔淑娟；孟冬梅；彭晓旻；石伟先；杨鹏；黄芳；王全意
关键词：甲型流感病毒, EGFP, 转染, 稳定细胞系
摘要：目的 构建pDZ-EGFP的真核表达重组质粒,转染MDCK细胞,建立增强型绿色荧光蛋白稳定转染的报告细胞系,提供更为直观、快速的检测甲型流感病毒的新途径.方法 将PCR扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因插入到pDZ载体中,将获得的pDZ-EGFP重组质粒用lipo-fectamine 2000转染MDCK细胞,通过G418进行选择培养,建立稳定转染的细胞系.传至3代,提取细胞总DNA,用EGFP的特异性引物进行PCR扩增及测序,鉴定细胞报告系统的稳定性；接种标准甲型流感毒株,用荧光显微镜和蛋白免疫印迹法检测EGFP的表达情况验证其应用性；另外,接种临床样本100份,用EGFP细胞报告系统检测的结果与Real-time RT-PCR检测结果进行比较,鉴定细胞报告系统的特异度和灵敏度.结果 稳定细胞系经传至3代,特异性EGFP引物利用PCR扩增到816bp的目的条带,测序结果与扩增的EGFP基因序列100％符合；稳定细胞系接种标准甲型流感毒株,24h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的增强表达,72h后用细胞裂解产物与EGFP的特异性抗体反应,获得目的条带；EGFP细胞报告系统检测的100份临床样本与Real-time RT-PCR检测结果相比,其特异度和灵敏度分别为88.52％和89.74％.结论 成功构建了pDZ-EGFP真核表达载体及稳定转染的MDCK细胞系,为甲型流感病毒的细胞培养鉴定及后期的致病机制的研究奠定了基础.
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